Фитотерапия
Запись на прием:
+7(916) 501-56-09

Бесплатный звонок по России: 8 800 775-65-02

ФИТОТЕРАПИЯ+

ЛЕКТИНЫ ПРОБИОТИКОВ И ФИТОКОМПЛЕКС - -ПЕРСПЕКТИВНЫЕ АЛЬТЕРНАТИВНЫЕ АНТИМИКРОБНЫЕ АГЕНТЫ

Лахтин М.В., Байракова А.Л., Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Корсун В.Ф. ФГУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора РФ; РУДН

Резюме. Проведен скрининг роста кандид С.albicans, C.crusei и C.tropicalis в присутствии лектинов лактобацилл (ЛЛ), бифидобактерий (ЛБ) или фитокомплекса. Все лектины действовали дозозависимо, а картины ингибирования зависели от типа лектина, антибиотика и природы штамма. Выявлялись межвидовые и межштаммовые различия действия лектинов. Ингибирование кандид анионными лектинами было эффективнее, чем катионными. В случае антибиотиков эффективность азолов превосходила таковую амфотерицина и нистатина. Картины ингибирования лектинами и антибиотиками дополняли друг друга. При длительном контакте с кандидами ЛЛ и ЛБ проявляли антикандидный синергизм. В случае лектинсодержащего фитокомплекса имитировался суммарный эффект ЛЛ и ЛБ. Действие ЛБ (сильный ранний ответ патогена) превосходило действие ЛЛ (более поздний ответ). Лектины ингибировали рост нистатин-резистентных штаммов. Выявлены высокочувствительные и резистентные к лектинам штаммы. Заключили, что исследованные лектины перспективны как дополняющие антибиотики, микотики, фунгициды и биоциды антимикробные агенты.

Ключевые слова: фитопрепараты, пробиотики, лектины, альтернативные антипатогены. Введение.

Фито- и другие лектины обладают широким спектром активностей и мощным потенциалом регуляции метаболизма, в том числе благодаря способности избирательно взаимодействовать с ферментами различных классов [1-3]. В настоящее время в связи с ростом резистентности возбудителей инфекций к традиционным лекарственным препаратам актуальным является поиск альтернативных антимикробных средств. Лектины пробиотических штаммов микроорганизмов (используемых для производства пробиотиков) и фитолектины обладают разнообразным антимикробным  действием,   в   том   числе   против  резистентных   к антибиотику клинически значимых штаммов [4-7]. Отмечен синергизм антипатогенного действия лектинов пробиотических бактерий и фитопрепарата [6]. Механизмы антипатогенного действия лектинов, по-видимому, различаются (дополняют друг друга) [7].

Целью работы было дальнейшее изучение механизмов антимикробной активности лектинов.

Материалы и методы. С помощью диск-диффузионного метода в стандартных условиях на агаровой среде Сабуро в чашках Петри проводили скрининг роста 29 свежевыделенных клинических штаммов кандид С. albicans, С. crusei и С. tropicalis в присутствии стандартизированных препаратов лектинов лактобацилл (анионных и катионных: анЛЛ, каЛЛ), бифидобактерий (анЛБ, каЛБ) или фитокомплекса (из растительного сырья - смеси лапчатки и звездчатки). Использовали также стандартные диск-антибиотики: амфотерицин-В[А], итраконазол[И], кетоконазол[Ке], клотримазол[Кл] и нистатин[Н]. Видовую идентификацию кандид проводили на хромогенных средах (HiMedid). Определение микробостатической активности раствора лектина определяли в жидких культурах методом титрования. По стандарту мутности доводили концентрацию микробной культуры до соответствующих оптических единиц. В опыте использовался раствор лектина в концентрации, вызывающей аналогичный фитогемагглютинину (стандартному лектину из семян фасоли) эффект в отношении миграции макрофагов млекопитающего [7]. Суточные культуры титровали с шагом, равным КГ2. К 0,5 мл культуры соответствующего разведения (исходного, 1-го [10"2] или 2-го [Ю-4]) добавляли 0,5 мл препарата лектина. Культуры инкубировали в термостате при 37°С в течение 1 часа. Затем добавляли 4 мл бульона "Браун"и через 48 часов инкубации при 37°С учитывали микробостатический эффект препарата. В табл. 1 микробные концентрации приведены в условных единицах (по стандартам мутности).

Собственные результаты.

Все лектины действовали дозозависимо. Картины ингибирования роста кандид зависели от типа лектина, антибиотика и природы клинического штамма. Выявлялись межвидовые и межштаммовые различия действия лектинов. Ингибирование кандид анионными лектинами было эффективнее, чем катионными. Для всех видов кандид эффективность азоловых антибиотиков превосходила таковую А и Н. При сравнении рядов эффективности антибиотиков в случае С. albicans (Ке>Кл>И>А>Н) и С. tropicalis (Кл>Ке>И>А=Н) различие наблюдалось только в положении Ке, преимущественно ингибирующего С. albicans. Рост штаммов обоих видов сильнее ингибировался в присутствии анЛБ (анЛБ>анЛЛ). Наоборот, в случае штаммов С. crusei анЛЛ проявляли высокую эффективность (анЛЛ»анЛБ). Штаммы С. crusei характеризовались сниженным ответом на антибиотики и меньшей способностью дифференцировать тип антибиотика. При этом последовательность эффективности антибиотиков (Кл>И>Ке>А>Н) отличалась от С. tropicalis только положением И (преимущественное ингибирование), а от С. albicans - еще и положением Кл, совпадающим с его положением в ряду для С. tropicalis. При длительном контакте с кандидами ЛЛ и ЛБ проявляли синергизм против штаммов С. albicans (анЛЛ и анЛБ, каЛЛ и анЛЛ, каЛЛ и Н), а действие фитокомплекса с лектинами имитировало суммарный эффект ЛЛ и ЛБ и обладало сходством с действием ЛБ (сильный ранний ответ патогена) или ЛЛ (более поздний ответ). Лектины ингибировали рост нистатин-резистентных штаммов. Выявлены высокочувствительные и высокорезистентные к лектинам штаммы.

Результаты антикандидной эффективности лектиновых дисков подтверждены анализом микробостатической активности лектинов в культурах методом титрования (Табл. 1). Как видно из таблицы, препарат анЛБ обладал фунгистатическим действием в жидких культурах С. albicans, причем эффективность препарата возрастала по мере снижения конечной концентрации кандид в культуре. Эти результаты указывают на возможные изменения соотношения морфологических форм кандид в сильно разбавленных культурах в сторону увеличения форм с повышенной чувствительностью к лектинам. Заключение.

Результаты указывают на перспективность содержащих лектины препаратов в качестве альтернативных селективных, дополняющих антибиотики, микотики, фунгициды и биоциды антимикробных агентов.

Выводы:

  1. Лектины обладают селективностью против кандид, отличающейся от действия антибиотиков.
  2. Возможны комбинации типа лектина и типа антибиотика, повышающие общую эффективность и селективность антикандидного действия.
  3. Результаты антипатогенной эффективности лектиновых дисков подтверждены анализом микробостатической активности лектинов в культурах.
  4. Возможно использование содержащих лектины препаратов в качестве селективных фунгистатиков в жидких средах.

Литература:

1.       Корсун В.Ф., Лахтин В.М., Корсун Е.В., Мицконас А. Фитолектины. Руководство по клинической фитотерапии. - М.: Практическая медицина.- 2007.-285 с.

2.       Лахтин М.В., Алешкин В.А., Лахтин В.М., Несвижский Ю.В., Афанасьев С.С., Поспелова В.В. Роль лектинов пробиотических микроорганизмов в жизнеобеспечении макроорганизма. Вестник РАМН. 2010. №2. С.3-8.

3.       Лахтин М.В., Лахтин В.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Корсун В.Ф.

Фитолектины и фитоферменты в биологии и медицине. Практ. Фитотерапия. 2010. № 1. С.12 - 18.

  1. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Кохановская Н.А., Пожалостина Л.В., Корсун В.Ф. Лечебный и пробиотический потенциал лектинсодержащих фитопрепаратов. Новые подходы на примере фитокомплекса Эндокринола. Практич. Фитотерапия. 2009. № 1. С.5 - 12.
  2. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Пожалостина Л.В., Поспелова В.В., Корсун В.Ф. Противогрибковый потенциал лектиновых пробиотических и фитопрепаратов: типы, механизмы и факторы действия против патогенных грибков человека. На примере пробиотических бактерий человека и фитокомплекса Эндокринола. Практ. Фитотерапия. 2009. № 4. С. 17 - 25.
  3. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Корсун В.Ф. Фито- и пробиотические лектины - синергичные антипатогены. Практ. Фитотерапия. 2010. № 1. С. 5 - 11.
  4. Lakhtin М., Alyoshkin V., Lakhtin V., Afanasyev S., Pozhalostina L., Pospelova V. Probiotic lactobacillus and bifidobacteria! lectins against Candida albicans and Staphylococcus aureus clinical strains: new class of pathogen biofilm destructors. Probiotics and Antimicrobial Proteins. 2010. DOl: 10.1007/s 12602-010-9046-3. инкубации.

Rambler's Top100 Rambler's Top100